一種磷酸鋁佐劑的制備方法及裝置

1.本技術(shù)是對(duì)申請(qǐng)日2017.12.20日，申請(qǐng)?zhí)?01711387856.9，發(fā)明名稱“一種磷酸鋁佐劑的制備方法”的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。

技術(shù)領(lǐng)域

2.本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種磷酸鋁佐劑的制備方法。

背景技術(shù)：

3.磷酸鋁佐劑(aluminium phosphate)是一種羥基磷酸鋁復(fù)合物，在疫苗產(chǎn)品中應(yīng)用于陽(yáng)離子抗原的吸附。商品磷酸鋁佐劑的等電點(diǎn)是5.0，在ph7.4的溶液中呈陰離子形式存在，磷酸基團(tuán)對(duì)羥基的置換程度取決于反應(yīng)物和制備的條件及其等電點(diǎn)。

4.鋁佐劑具有高度的生物安全性。stanley等通過(guò)同位素標(biāo)記法證明肌肉注射的鋁佐劑在機(jī)體內(nèi)可以被有效的溶解吸收并最終通過(guò)尿液排出。此外，鋁佐劑可通過(guò)多種機(jī)制增強(qiáng)抗原的免疫原性提高免疫應(yīng)答。因此，鋁佐劑在疫苗制劑工藝中被廣泛應(yīng)用，特別是含有蛋白或多糖抗原的疫苗中。美國(guó)授權(quán)的含鋁佐劑的兒童用疫苗包括：白喉-破傷風(fēng)-無(wú)細(xì)胞百日咳疫苗(dtap)、b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗、肺炎結(jié)合疫苗、乙肝疫苗、人乳頭瘤疫苗。

5.在生理?xiàng)l件下，磷酸鋁佐劑適用于吸附陽(yáng)離子抗原，被應(yīng)用于多價(jià)肺炎結(jié)合疫苗中。磷酸鋁佐劑的制備，一般方法是將可溶性鋁鹽溶液和磷酸鹽溶液以一定的比例混合。根據(jù)混合的方法不同，具體常見(jiàn)包括連續(xù)反應(yīng)法和批量反應(yīng)法。配制磷酸鋁佐劑需要可溶性鋁鹽溶液，磷酸鹽溶液，以及合適的置換緩沖溶液體系。

6.鋁佐劑在生產(chǎn)和使用過(guò)程中經(jīng)歷了兩種環(huán)境：佐劑吸附抗原的疫苗環(huán)境；皮下或者肌肉注射后的組織間液環(huán)境。佐劑吸附抗原的疫苗環(huán)境，決定了抗原的吸附率；而吸附率會(huì)影響機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答反應(yīng)。鋁佐劑顆粒的大小是鋁吸附制品質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)，并且可能影響到制品的免疫特性。在疫苗制劑中，典型的鋁佐劑粒徑大?。?0nm。因此，如何有效的控制磷酸鋁佐劑的粒徑大小是制備磷酸鋁佐劑工藝中的重要環(huán)節(jié)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

7.本發(fā)明目的是提供一種磷酸鋁佐劑的制備方法。

8.本發(fā)明技術(shù)方案如下：

9.一種磷酸鋁佐劑的制備方法，包括以下步驟：

10.1)磷酸鋁溶液的配制

11.將堿性可溶性磷酸鹽溶液以及可溶性鋁鹽溶液以一定的流速同時(shí)泵入到混合器中，并在所述混合器內(nèi)充分混合，使反應(yīng)過(guò)程中制得磷酸鋁溶液ph恒定，波動(dòng)偏差不大于

±

0.02；

12.其中，所述可溶性磷酸鹽包括磷酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀中的一種或幾種；所述堿性可溶性磷酸鹽溶液由所述可溶性磷酸鹽溶液和氫氧化鈉

溶液配制的具有一定酸堿緩沖能力的混合溶液；

13.所述可溶性鋁鹽包括硫酸鋁鉀，硝酸鋁，氯化鋁中的一種或幾種；

14.2)磷酸鋁溶液的置換處理

15.將步驟1)制得的磷酸鋁溶液與置換溶液按體積比1：3-1：5混勻，將所得混合液自然沉降或離心后除去上清，收集磷酸鋁沉淀；

16.3)磷酸鋁溶液的重懸處理

17.將步驟2)所得磷酸鋁沉淀樣品滅菌，然后進(jìn)行重懸處理；即得磷酸鋁佐劑溶液。

18.上述制備方法中，

19.步驟1)使反應(yīng)過(guò)程中制得磷酸鋁溶液ph恒定在4.0-6.0。

20.步驟1)所述可溶性磷酸鹽優(yōu)選為磷酸三鈉。

21.步驟1)所述可溶性鋁鹽優(yōu)選為氯化鋁。

22.步驟1)所述可溶性鋁鹽溶液濃度優(yōu)選為0.15-0.25mol/l。

23.步驟1)所述可溶性磷酸鹽溶液的濃度為0.1-0.4mol/l，優(yōu)選為0.15-0.25mol/l。

24.步驟1)所述堿性可溶性磷酸鹽溶液的ph范圍11.5-12.5。

25.步驟1)通過(guò)恒流泵控制反應(yīng)原料流速；進(jìn)一步地，所述恒流泵，包括柱塞泵、螺桿泵、隔膜泵等，可使用兩個(gè)恒流泵分別控制兩種反應(yīng)液的輸送。

26.步驟1)控制所述反應(yīng)液的流速為200-1000ml/min，優(yōu)選400-600ml/min。

27.步驟1)所述混合器選自靜態(tài)混合裝置或動(dòng)態(tài)混合裝置。

28.進(jìn)一步地，所述靜態(tài)混合裝置包括混合腔體，所述混合腔體的一端至少設(shè)有二個(gè)物料入口，另一端設(shè)有物料出口；所述混合腔體內(nèi)設(shè)有一系列疊合在一起的微混合池疊片，每片微混合池疊片上均設(shè)有彼此串聯(lián)的微小腔體(孔道)，使物料流經(jīng)時(shí)在腔體內(nèi)快速混合。

29.所述微混合池疊片的數(shù)量及所述微混合池疊片上微小腔體(孔道)的大小均可根據(jù)需要調(diào)節(jié)。

30.進(jìn)一步地，所述微混合池疊片的數(shù)量為1-6對(duì)，和/或，所述微混合池疊片上微小腔體(孔道)的大小為0.1-0.8mm。

31.更進(jìn)一步地，所述微混合池疊片的數(shù)量為4-6對(duì)，和/或，所述微混合池疊片上微小腔體(孔道)的大小為0.2mm。

32.更進(jìn)一步地，所述微混合池疊片上還設(shè)有孔，其作用是使物料(反應(yīng)液)高速通過(guò)腔體，產(chǎn)生渦流剪切力；連續(xù)剪切力有效降低顆粒的粒徑大小。

33.進(jìn)一步地，所述動(dòng)態(tài)混合裝置包括混合腔體，所述混合腔體的一端至少設(shè)有二個(gè)物料入口，另一端設(shè)有物料出口；所述混合腔體內(nèi)還設(shè)有高速攪拌混勻裝置，使物料流經(jīng)時(shí)在腔體內(nèi)快速混合。

34.所述高速攪拌混勻裝置的攪拌轉(zhuǎn)速均可根據(jù)需要調(diào)節(jié)，產(chǎn)生不同的剪切力進(jìn)而控制佐劑的粒徑大小。

35.進(jìn)一步地，所述動(dòng)態(tài)混合器攪拌轉(zhuǎn)速為200-2000rpm。

36.更進(jìn)一步地，所述動(dòng)態(tài)混合器攪拌轉(zhuǎn)速為400-800rpm。

37.進(jìn)一步地，步驟1)制得的磷酸鋁溶液與置換溶液的體積比為1：3-1：5。步驟2)所述置換溶液為注射用水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖溶液中的一種，優(yōu)選為生理鹽水；所述生理鹽

水與本領(lǐng)域常規(guī)含義相同，優(yōu)選為0.150mol/l nacl的溶液；所述磷酸鹽緩沖溶液中優(yōu)選含有0.137mol/l nacl、2.7mmol/l kcl、10mmol/l na2hpo4、2mmol/lnah2po4。

38.步驟2)可采用自然沉降或離心的置換處理方法。

39.步驟2)所述置換比例，制得的磷酸鋁溶液與所述置換溶液按體積比為1:2-1:5；所述置換次數(shù)為1-4次；優(yōu)選地，生理鹽水，置換體積比例1:3，置換次數(shù)3次。

40.步驟2)置換處理的目的主要是通過(guò)改變磷酸鋁溶液緩沖體系，去除游離的磷酸根離子和鋁離子，獲得純度高的磷酸鋁樣品。

41.步驟3)所述滅菌可采用本領(lǐng)域常規(guī)方法，例如中國(guó)藥典中記載的滅菌方法。優(yōu)選采用高壓滅菌，溫度121℃，時(shí)間為10-30min。

42.步驟3)所述重懸處理為將滅菌處理后的磷酸鋁樣品在攪拌速度200-800rpm條件下攪拌1-16h；優(yōu)選在攪拌速度400-800rpm條件下攪拌4-16h。

43.具體地，可將步驟2)所得磷酸鋁沉淀樣品放入無(wú)熱源的10l藍(lán)蓋瓶中，并加入磁力攪拌子，滅菌，然后進(jìn)行重懸處理；所述攪拌優(yōu)選采用磁力攪拌器。優(yōu)選磁力攪拌子的大小為

44.本發(fā)明還包括實(shí)現(xiàn)上述磷酸鋁佐劑制備方法的反應(yīng)裝置，包括連續(xù)反應(yīng)裝置。

45.所述連續(xù)反應(yīng)裝置，包括反應(yīng)容器，分別盛放可溶性磷酸鹽溶液及可溶性鋁鹽溶液的貯存容器，用于分別將可溶性磷酸鹽溶液、可溶性鋁鹽溶液以恒定流速泵入反應(yīng)容器的恒流泵，在所述恒流泵的輸送下，可溶性磷酸鹽溶液和可溶性鋁鹽溶液通過(guò)混合器匯入同一管道，然后進(jìn)入所述反應(yīng)容器；所述連續(xù)反應(yīng)裝置還包括用于檢測(cè)所述反應(yīng)容器中反應(yīng)液ph值的ph計(jì)，以及用于攪拌所述反應(yīng)容器中反應(yīng)液的磁力攪拌子和/或磁力攪拌器。

46.進(jìn)一步地，混合器包括靜態(tài)混合裝置，或動(dòng)態(tài)混合裝置。

47.進(jìn)一步地，所述反應(yīng)容器與泵之間，及所述貯存容器與泵之間通過(guò)管道連接(優(yōu)選硅膠管道)。

48.在一個(gè)實(shí)施例方案中，連續(xù)反應(yīng)裝置是將可溶性鋁鹽和磷酸鹽溶液以恒定速度共同滴加到反應(yīng)容器中，在制備過(guò)程中維持磷酸鋁溶液的ph恒定。

49.進(jìn)一步地，所述反應(yīng)容器可事先存放一定體積的可溶性鋁鹽溶液。

50.進(jìn)一步地，所述反應(yīng)容器與泵之間，及所述貯存容器與泵之間通過(guò)管道連接(優(yōu)選硅膠管道)。

51.本發(fā)明還包括上述方法制備的磷酸鋁佐劑(溶液)。

52.本發(fā)明制備的磷酸鋁佐劑粒徑可以有效的控制在3.5-7.5nm之間；等電點(diǎn)為4.0-6.0；進(jìn)一步地，所述磷酸鋁佐劑的等電點(diǎn)為5.0。

53.本發(fā)明還包括上述磷酸鋁佐劑在制備疫苗中的應(yīng)用。

54.本發(fā)明所制備的磷酸鋁佐劑在特定的緩沖溶液體系中應(yīng)用于吸附一種或者多種抗原。

55.所述疫苗優(yōu)選為多價(jià)肺炎結(jié)合疫苗、白喉-破傷風(fēng)-無(wú)細(xì)胞百日咳疫苗(dtap)、b型流感嗜血桿菌結(jié)合疫苗、乙型肝炎dna疫苗等。其中，優(yōu)選多價(jià)肺炎結(jié)合疫苗，包括多種血清型肺炎鏈球菌莢膜多糖和載體蛋白共價(jià)連接形成的復(fù)合物，肺炎鏈球菌莢膜多糖血清型包括1、3、4、5、6a、6b、7f、9v、18c、19f、19a、和23f，載體蛋白包括dt、tt、crm197。

56.其中，優(yōu)選所述疫苗中磷酸鋁佐劑的濃度為0.1-0.4mg/ml。

57.進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，所述疫苗中鋁的最終吸附濃度在0.22-0.28mg/ml是磷酸鋁佐劑的最佳濃度。

58.本發(fā)明采用不同ph和不同磷酸離子濃度下制備磷酸鋁，對(duì)磷酸鋁的配制工藝和后處理工藝進(jìn)行了探索改良，以獲得吸附能力和外觀形態(tài)均良好的磷酸鋁佐劑，從而滿足多價(jià)肺炎結(jié)合疫苗等制備工藝的要求。

59.本發(fā)明對(duì)現(xiàn)有磷酸鋁佐劑制備工藝進(jìn)行改進(jìn)，采用本發(fā)明方法可以實(shí)現(xiàn)磷酸鋁佐劑表面電荷和粒徑趨于穩(wěn)定，且ph值更加接近于人體體液ph值，適用于一種或多種抗原的吸附，符合多種疫苗在制劑中的應(yīng)用需求。

附圖說(shuō)明

60.圖1為本發(fā)明連續(xù)反應(yīng)裝置示意圖；

61.其中，反應(yīng)容器1，貯存容器2，恒流泵3，混合器4，管道5。

62.圖2為制備的磷酸鋁粒徑圖譜。

63.圖3為制備的磷酸鋁佐劑在特定的緩沖溶液體系中應(yīng)用于吸附一種抗原，吸附后樣品粒徑圖譜。

64.圖4為本發(fā)明靜態(tài)混合裝置結(jié)構(gòu)示意圖；其中，1為混合腔體；21和22為物料入口；3為物料出口；5、51、52、53為微混合池疊片；6、微混合池疊片上的孔；7、微混合池疊片上的微小腔體(孔道)。

65.圖5為本發(fā)明動(dòng)態(tài)混合器照片；其中，8為混合腔體；91和92為物料入口；10為物料出口。

具體實(shí)施方式

66.本發(fā)明主要涉及磷酸鋁佐劑的配制方法、置換處理、重懸處理以及吸附能力評(píng)價(jià)等方面。更具體的來(lái)說(shuō)下文所述的本發(fā)明針對(duì)所屬領(lǐng)域中關(guān)于使磷酸鋁佐劑表面電荷和粒徑趨于穩(wěn)定且適用于一種或多種抗原的吸附。

67.上面的公開(kāi)一般性描述了本發(fā)明。通過(guò)下面的特定實(shí)施例可以更加完全的理解本發(fā)明。這些實(shí)例僅僅用于闡明目的并且不限定本發(fā)明的應(yīng)用范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。

68.以下所述的磷酸鋁樣品的表面電荷(surface potential)通過(guò)zetasizer nano zsp設(shè)備測(cè)定。

69.實(shí)施例1

70.如圖1所示，一種用于制備磷酸鋁佐劑的連續(xù)反應(yīng)裝置，包括反應(yīng)容器1，分別盛放可溶性磷酸鹽溶液及可溶性鋁鹽溶液的貯存容器2，用于分別將可溶性磷酸鹽溶液、可溶性鋁鹽溶液以恒定流速泵入反應(yīng)容器的恒流泵3，在所述恒流泵3的輸送下，可溶性磷酸鹽溶液和可溶性鋁鹽溶液通過(guò)混合器4匯入同一管道5，然后進(jìn)入所述反應(yīng)容器1；所述連續(xù)反應(yīng)裝置還包括用于檢測(cè)所述反應(yīng)容器中反應(yīng)液ph值的ph計(jì)，以及用于攪拌所述反應(yīng)容器中反應(yīng)液的磁力攪拌子和磁力攪拌器。

71.進(jìn)一步地，所述混合器為以下實(shí)施例2所述的靜態(tài)混合裝置，或?qū)嵤├?的動(dòng)態(tài)混合裝置。

72.實(shí)施例2

73.如圖4所示的一種混合器，其為靜態(tài)混合裝置，該靜態(tài)混合裝置包括混合腔體1，所述混合腔體1的一端至少設(shè)有二個(gè)物料入口(分別為物料入口21、22)，另一端設(shè)有物料出口3；所述混合腔體1內(nèi)設(shè)有一系列疊合在一起的微混合池疊片7，每片微混合池疊片7上均設(shè)有彼此串聯(lián)的微小腔體(孔道)8，使物料流經(jīng)時(shí)在腔體內(nèi)快速混合。

74.所述微混合池疊片的數(shù)量及所述微混合池疊片上微小腔體(孔道)的大小均可根據(jù)需要調(diào)節(jié)。

75.進(jìn)一步地，所述微混合池疊片的數(shù)量為1-6對(duì)，和/或，所述微混合池疊片上微小腔體(孔道)的大小為0.1-0.8mm。

76.更進(jìn)一步地，所述微混合池疊片的數(shù)量為4-6對(duì)，和/或，所述微混合池疊片上微小腔體(孔道)的大小為0.2mm。

77.圖4a為靜態(tài)混合裝置結(jié)構(gòu)示意圖，圖4b為微混合池疊片結(jié)構(gòu)示意圖(編號(hào)51、52、53)，圖4c為微混合池疊片照片。

78.實(shí)施例3

79.如圖5所示的一種混合器，其為動(dòng)態(tài)混合裝置。

80.該動(dòng)態(tài)混合裝置包括混合腔體8，所述混合腔體8的一端至少設(shè)有二個(gè)物料入口(分別為物料入口91、92)，另一端設(shè)有物料出口10；所述混合腔體8內(nèi)設(shè)有高速攪拌混勻裝置，使物料流經(jīng)時(shí)在腔體內(nèi)快速混合。

81.所述高速攪拌混勻裝置的攪拌轉(zhuǎn)速均可根據(jù)需要調(diào)節(jié)，產(chǎn)生不同的剪切力進(jìn)而控制佐劑的粒徑大小。

82.進(jìn)一步地，所述動(dòng)態(tài)混合器攪拌轉(zhuǎn)速為200-2000rpm。

83.更進(jìn)一步地，所述動(dòng)態(tài)混合器攪拌轉(zhuǎn)速為400-800rpm。

84.實(shí)驗(yàn)例1靜態(tài)混合器磷酸鋁溶液的配制方法研究

85.本實(shí)驗(yàn)例通過(guò)實(shí)施例2靜態(tài)混合器制備磷酸鋁溶液。

86.制備磷酸鋁溶液的方法包括：在連續(xù)反應(yīng)容器裝置中，以恒定的流速400ml/min混合可溶性鋁鹽溶液和堿性可溶性磷酸鹽溶液，在配制過(guò)程中維持反應(yīng)體系的ph在5.0

±

0.1；利用蠕動(dòng)泵以恒定的流速?gòu)姆磻?yīng)容器溶液中泵出已制備的磷酸鋁溶液樣品，維持反應(yīng)容器中恒定的溶液體積；連續(xù)收集制備條件穩(wěn)定后的磷酸鋁樣品，使用磁力攪拌器繼續(xù)攪拌1h混合均勻。

87.如圖1所示，連續(xù)反應(yīng)容器裝置包括：反應(yīng)容器(5l密閉容器)，用于分別將堿性可溶性磷酸鹽溶液、可溶性鋁鹽溶液以恒定流速泵入反應(yīng)容器的泵(本實(shí)施例采用的是螺桿泵)，硅膠管道，實(shí)施例2所述靜態(tài)混合裝置(疊片渦流孔徑為0.2μm，疊片數(shù)量為4對(duì))，實(shí)驗(yàn)室ph計(jì)(本實(shí)驗(yàn)例采用的是mettler toledo型號(hào)fe20)，磁力攪拌子(本實(shí)驗(yàn)例采用的是型號(hào))，磁力攪拌器(本實(shí)驗(yàn)例采用的是ika型號(hào)rct bs25)。

88.本實(shí)驗(yàn)例制備所述磷酸鋁溶液的體積是20l。在制備過(guò)程中，磷酸根離子作為緩沖體系，使磷酸鋁溶液的ph維持可以維持在某一恒定值。

89.實(shí)驗(yàn)材料：

90.可溶性鋁鹽溶液即氯化鋁溶液，濃度0.15-0.25mol/l，體積10l。

91.堿性可溶性磷酸鹽溶液，為由磷酸氫二鈉溶液和氫氧化鈉溶液配制的具有一定酸

堿緩沖能力的混合溶液，ph為12.5，磷酸根離子的濃度為0.15-0.25mol/l，體積10l。

92.實(shí)驗(yàn)例2動(dòng)態(tài)混合器制備磷酸鋁溶液的方法研究

93.本實(shí)驗(yàn)例通過(guò)實(shí)施例3動(dòng)態(tài)混合器制備磷酸鋁溶液。

94.制備磷酸鋁溶液的方法包括：在連續(xù)反應(yīng)容器裝置中，以恒定的流速600ml/min混合可溶性鋁鹽溶液和堿性可溶性磷酸鹽溶液，在配制過(guò)程中維持反應(yīng)體系的ph在6.0

±

0.1；利用蠕動(dòng)泵以恒定的流速?gòu)姆磻?yīng)容器溶液中泵出已制備的磷酸鋁溶液樣品，維持反應(yīng)容器中恒定的溶液體積；連續(xù)收集制備條件穩(wěn)定后的磷酸鋁樣品，使用磁力攪拌器繼續(xù)攪拌1h混合均勻。

95.如圖1所示，連續(xù)反應(yīng)容器裝置包括：用于分別將可溶性磷酸鹽溶液、可溶性鋁鹽溶液以恒定流速泵入反應(yīng)容器的泵(本實(shí)驗(yàn)例采用的是隔膜泵)，硅膠管道，動(dòng)態(tài)混合裝置(轉(zhuǎn)速600rpm)，實(shí)驗(yàn)室ph計(jì)(本實(shí)驗(yàn)例采用的是mettler toledo型號(hào)fe20)，磁力攪拌子(本實(shí)驗(yàn)例采用的是型號(hào))，磁力攪拌器(本實(shí)驗(yàn)例采用的是ika型號(hào)rct bs25)。

96.本實(shí)驗(yàn)例制備所述磷酸鋁溶液的體積是80l。在制備過(guò)程中，磷酸根離子作為緩沖體系，使磷酸鋁溶液的ph維持可以維持在某一恒定值。

97.實(shí)驗(yàn)材料：

98.氯化鋁溶液，濃度0.15-0.25mol/l，體積40l。

99.磷酸三鈉溶液，濃度濃度0.15-0.25mol/l，體積40l。

100.實(shí)驗(yàn)例3磷酸鋁樣品置換處理方法研究

101.本實(shí)驗(yàn)例磷酸鋁樣品置換處理是指將制備的磷酸鋁溶液通過(guò)離心或超濾的方法改變磷酸鋁沉淀的緩沖體系，置換去除游離的磷酸根離子以及其他鹽離子。

102.磷酸鋁溶液樣品1.1-1.3采用靜態(tài)混合器連續(xù)磷酸鋁的方法制備(同實(shí)驗(yàn)例1)；磷酸鋁溶液樣品1.4-1.6采用動(dòng)態(tài)混合器連續(xù)磷酸鋁的方法制備(同實(shí)驗(yàn)例2)。

103.將以上制得的磷酸鋁溶液樣品分別進(jìn)行置換處理，即將磷酸鋁溶液樣品與置換溶液按照體積比1:3在容器中混勻、自然沉降后除去上清；重復(fù)3次，收集磷酸鋁沉淀。

104.其中，樣品1.1、1.4采用注射用水(s1)為置換溶液；

105.樣品1.2、1.5采用生理鹽水(s2，即0.150mol/l nacl溶液)為置換溶液；

106.樣品1.3、1.6采用磷酸鹽緩沖溶液(s3)為置換溶液；所述磷酸鹽緩沖溶液成分：0.137mol/l nacl，2.7mmol/l kcl，10mmol/lna2hpo4，2mmol/l nah2po4。

107.分別檢測(cè)磷酸鋁溶液在置換過(guò)程中三個(gè)階段的ph，包括：1.制備容器中樣品ph，2.置換前收集容器中樣品ph，3.置換后收集容器中樣品ph。結(jié)果見(jiàn)表1。

108.從表1中可以看出，相對(duì)其他置換溶液條件使用生理鹽水處理的樣品ph更加恒定不變，有利于維持磷酸鋁佐劑結(jié)構(gòu)和吸附能力的穩(wěn)定性。

109.表1：磷酸鋁佐劑樣品的置換處理

[0110][0111]

表1中磷酸鋁溶液制備階段的ph是指所制得的磷酸鋁溶液樣品的等電點(diǎn)；置換階段的ph是指所置換后所得的磷酸鋁溶液樣品的等電點(diǎn)。

[0112]

實(shí)驗(yàn)例4磷酸鋁佐劑的重懸處理研究

[0113]

本實(shí)驗(yàn)例所述磷酸鋁佐劑的重懸處理是指將置換后的磷酸鋁樣品高壓滅菌處理，冷卻后以不同的攪拌速度重懸處理。

[0114]

1)磷酸鋁溶液的配制方法同實(shí)驗(yàn)例3，樣品編號(hào)1.5。

[0115]

2)磷酸鋁溶液的置換處理

[0116]

將步驟1)制備的磷酸鋁溶液與生理鹽水按體積比1:3混勻，將所得混合液自然沉降后除去上清，重復(fù)3次，收集磷酸鋁沉淀。

[0117]

3)將步驟2)所得磷酸鋁沉淀樣品于121℃高壓滅菌30min后，冷卻至常溫，指用磁力攪拌子重懸，攪拌速度200-1600rpm，攪拌時(shí)間1-16h。結(jié)果見(jiàn)表2。

[0118]

從表2中可以看出，重懸處理的攪拌速度和攪拌時(shí)間是影響磷酸鋁粒徑的兩個(gè)關(guān)鍵因素。其中，在攪拌速度為400-800rpm攪拌時(shí)間為4-16h條件下，磷酸鋁佐劑的粒徑可以有效的控制在7.5-10nm之間。

[0119]

表2：磷酸鋁佐劑樣品的重懸條件

[0120]

樣品編號(hào)攪拌速度(rpm)攪拌時(shí)間(h)粒徑(nm)1.5-1200112.5621.5-2200411.3371.5-32001610.2871.5-4400114.5561.5-540049.4241.5-6400169.5731.5-7800112.2811.5-880049.7421.5-9800168.6881.5-10160016.638

1.5-11160046.2461.5-121600165.641

[0121]

實(shí)驗(yàn)例5磷酸鋁佐劑吸附評(píng)價(jià)

[0122]

采用吸附蛋白的方法評(píng)價(jià)磷酸鋁佐劑的吸附能力，其中鋁佐劑吸附為磷酸鋁佐劑在特定的緩沖溶液體系中應(yīng)用于用來(lái)吸附一種或者多種抗原。

[0123]

實(shí)驗(yàn)樣品：實(shí)施例4樣品編號(hào)為1.5-8的磷酸鋁佐劑。實(shí)驗(yàn)方法：將一種或者多種抗原(本實(shí)驗(yàn)例使用的是破傷風(fēng)類毒素蛋白)加入到特定的緩沖溶液中，再按表3加入不同濃度的磷酸鋁佐劑，攪拌吸附，測(cè)定磷酸鋁吸附率；吸附率％＝1-上清蛋白/總蛋白。

[0124]

所述特定的緩沖溶液包含以下組分：最終濃度0.150mol/l的氯化鈉溶液、最終濃度為5mmol/l且ph為6.1-6.5的琥珀酸鹽溶液以及最終質(zhì)量百分比為0.02％的聚山梨醇酯80溶液。

[0125]

表3：磷酸鋁佐劑吸附評(píng)價(jià)

[0126][0127][0128]

從表3中可以看出，磷酸鋁佐劑的吸附率和鋁的最終濃度呈正相關(guān)關(guān)系；當(dāng)鋁的最終濃度高于0.28mg/ml時(shí)，吸附率增加緩慢達(dá)到了平臺(tái)期；鋁的最終濃度在0.22-0.28mg/ml是磷酸鋁佐劑的最佳濃度。

[0129]

吸附前磷酸鋁粒徑圖譜見(jiàn)圖2，吸附樣品圖譜見(jiàn)圖3。

[0130]

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。技術(shù)特征：

1.制備磷酸鋁佐劑的反應(yīng)裝置，其特征在于，包括連續(xù)反應(yīng)裝置；所述連續(xù)反應(yīng)裝置，包括反應(yīng)容器，分別盛放可溶性磷酸鹽溶液及可溶性鋁鹽溶液的貯存容器，用于分別將可溶性磷酸鹽溶液、可溶性鋁鹽溶液以恒定流速泵入反應(yīng)容器的恒流泵，在所述恒流泵的輸送下，可溶性磷酸鹽溶液和可溶性鋁鹽溶液通過(guò)混合器匯入同一管道，然后進(jìn)入所述反應(yīng)容器。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備磷酸鋁佐劑的反應(yīng)裝置，其特征在于，所述混合器包括動(dòng)態(tài)混合裝置；其中，所述動(dòng)態(tài)混合裝置包括混合腔體，所述混合腔體的一端至少設(shè)有二個(gè)物料入口，另一端設(shè)有物料出口；所述混合腔體內(nèi)還設(shè)有高速攪拌混勻裝置，使物料流經(jīng)時(shí)在腔體內(nèi)快速混合。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備磷酸鋁佐劑的反應(yīng)裝置，其特征在于，所述混合器包括靜態(tài)混合裝置；其中，所述靜態(tài)混合裝置包括混合腔體，所述混合腔體的一端至少設(shè)有二個(gè)物料入口，另一端設(shè)有物料出口；所述混合腔體內(nèi)設(shè)有一系列疊合在一起的微混合池疊片，每片微混合池疊片上均設(shè)有彼此串聯(lián)的微小腔體，使物料流經(jīng)時(shí)在腔體內(nèi)快速混合。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備磷酸鋁佐劑的反應(yīng)裝置，其特征在于，所述靜態(tài)混合裝置中所述微混合池疊片的數(shù)量為1-6對(duì)，和/或，所述微混合池疊片上微小腔體的大小為0.1-0.8mm；優(yōu)選地，所述微混合池疊片的數(shù)量為4-6對(duì)，和/或，所述微混合池疊片上微小腔體的大小為0.2mm。5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的制備磷酸鋁佐劑的靜態(tài)混合裝置，其特征在于，所述靜態(tài)混合裝置中所述微混合池疊片上還設(shè)有孔，使物料高速通過(guò)腔體，產(chǎn)生渦流剪切力。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的制備磷酸鋁佐劑的反應(yīng)裝置，其特征在于，所述連續(xù)反應(yīng)裝置還包括用于檢測(cè)所述反應(yīng)容器中反應(yīng)液ph值的ph計(jì)，以及用于攪拌所述反應(yīng)容器中反應(yīng)液的磁力攪拌子和/或磁力攪拌器。7.制備磷酸鋁佐劑的方法，其特征在于，使用權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的反應(yīng)裝置進(jìn)行制備。8.一種動(dòng)態(tài)混合裝置，其特征在于，包括混合腔體，所述混合腔體的一端至少設(shè)有二個(gè)物料入口，另一端設(shè)有物料出口；所述混合腔體內(nèi)還設(shè)有高速攪拌混勻裝置，使物料流經(jīng)時(shí)在腔體內(nèi)快速混合。9.一種靜態(tài)混合裝置，其特征在于，包括混合腔體，所述混合腔體的一端至少設(shè)有二個(gè)物料入口，另一端設(shè)有物料出口；所述混合腔體內(nèi)設(shè)有一系列疊合在一起的微混合池疊片，每片微混合池疊片上均設(shè)有彼此串聯(lián)的微小腔體，使物料流經(jīng)時(shí)在腔體內(nèi)快速混合。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的靜態(tài)混合裝置，其特征在于，所述微混合池疊片的數(shù)量為1-6對(duì)，和/或，所述微混合池疊片上微小腔體的大小為0.1-0.8mm；優(yōu)選地，所述微混合池疊片的數(shù)量為4-6對(duì)；和/或，所述微混合池疊片上微小腔體的大小為0.2mm；和/或，所述微混合池疊片上還設(shè)有孔，使物料高速通過(guò)腔體，產(chǎn)生渦流剪切力。

技術(shù)總結(jié)

本發(fā)明涉及一種磷酸鋁佐劑的制備方法及裝置，所述方法包括磷酸鋁溶液的配制、磷酸鋁溶液的置換處理、磷酸鋁溶液的重懸處理。本方法生產(chǎn)工藝易于放大、工藝操作簡(jiǎn)單、制造成本低，適用于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)。采用本方法可以實(shí)現(xiàn)磷酸鋁佐劑的粒徑均趨于穩(wěn)定，并且pH值更加接近于人體體液的pH值，適用于一種或多種抗原的吸附，符合多種疫苗在制劑中的應(yīng)用需求。符合多種疫苗在制劑中的應(yīng)用需求。符合多種疫苗在制劑中的應(yīng)用需求。

技術(shù)研發(fā)人員：游哲榮 題靖 何迎楓 楊朝暉 劉建凱 周勝 曾虎 王智 沈林烽

受保護(hù)的技術(shù)使用者：利穗科技（蘇州）有限公司

技術(shù)研發(fā)日：2017.12.20

技術(shù)公布日：2022/1/28